Russian Federation
Currently, it is very important to find solutions aimed at improving the quality of fish feed, especially for sturgeon. There is an active search for alternative sources of feed protein and ways to increase the digestibility and digestibility of the traditional feed ingredients used. One of these alternative protein sources is the use of larvae of the black lion fly (Hermetia illucens). The use of dry biomass of black lion fly larvae was evaluated according to the blood of sterlet individuals - the amount of total whey protein, the ratio of protein fractions and the protein coefficient. Yearling sterlet (Acipenser ruthenus) kept in aquaculture conditions were used as research objects: 40 fish with an average weight of 145 ± 15.7 g were individually weighed to an accuracy of 0.1 g and placed for cultivation in fiberglass pools measuring 1.1 × 1.1 m in 2 groups (control and experiment). The fish were fed according to their ability to eat during the day with an interval of 4 hours. During the entire study period (30 days), water quality parameters were checked, including daytime temperature values with a minimum of 24 °C and a maximum of 27 °C (the average temperature was 26 ± 0.97 °C). Other measurements varied as follows: oxygen concentration of 7.9-9.4 mg/l and saturation of 81-99%. As a result of the research, a positive experience was gained. The level of total whey protein and its fractional composition in sterlet from the experimental group were close to the norm typical for sturgeon, while in fish from the control group there was an increased level of γ-globulins and a decrease in protein coefficient, which may indicate a strain on the body's protective and adaptive forces, unlike in fish from the control group from fish from the experimental group, where the proportion of this fraction was within the normal range.
sterlet, black lion, whey protein, protein fractions, albumins, globulins
Введение
Аквакультура осетровых начинала развиваться как способ удовлетворения растущего спроса населения на икру и мясо, а также для уменьшения нагрузки на чрезмерно эксплуатируемые дикие ресурсы. С 1997 г. все виды осетровых были добавлены в приложения СИТЕС (Конвенция о международной торговле видами, находящимися под угрозой исчезновения) для защиты популяций от вымирания [1]. Это определило окончательный переход от диких осетровых к выращиваемым на фермах для производства товарной продукции во многих странах.
Одним из краеугольных камней обеспечения рыб подходящей средой для роста при сохранении их в хорошем состоянии с высокими показателями выживаемости является обеспечение надлежащего качества корма. Надлежащее качество корма гарантирует не только высокие темпы роста, но и более высокую выживаемость рыбы [2].
Помимо того, что в аквакультуре корма должны полностью удовлетворять физиологическим потребностям выращиваемых рыб, не менее важна и экономическая выгода, т. к. затраты на кормление рыб в рыбоводстве весьма масштабны. Считается, что рыбная мука больше не способна поддерживать развитие индустрии аквакультуры в ближайшие годы. В связи с этим становится актуальным поиск альтернативных источников белка для устойчивого производства комбикормовой промышленности. Источники белка животного происхождения, такие как мука из насекомых, могут использоваться в качестве альтернативных источников рыбной муки в кормах для объектов аквакультуры. В последние годы резко возрос интерес к изучению муки из насекомых в рыбоводстве как возможной альтернативы корму.
Мука из насекомых – хороший источник белка, минералов и витаминов, аналогичный белку рыбной муки. Она также богата незаменимыми аминокислотами, особенно лизином, метионином и лейцином. Среди насекомых личинки мухи черной львинки особенно перспективны из-за их способности превращать пищевые отходы в белок высшего сорта [3]. Мука из личинки содержит около 30–58 % белка, 10–30 % липидов, незаменимые аминокислоты, макро- и микроэлементы, а также ценные витамины.
Соотношение фракций белков в сыворотке крови рыб является индикатором оценки физиолого-биохимического состояния рыб. Изменение состава и соотношения компонентов сыворотки крови приводит к нарушению гомеостаза, снижению иммунного ответа организма на воздействие внешней среды, болезням и является наиболее ранним ответом функциональных систем на неблагоприятные условия среды содержания рыб [4]. Таким образом, целью данной работы явилась оценка частичной замены рыбной муки на сухую биомассу личинок мухи черной львинки по белковым показателям крови особей стерляди – количеству общего сывороточного белка, соотношению белковых фракций и белковому коэффициенту.
Материалы и методы
В качестве объектов исследования использовали годовиков стерляди (Acipenser ruthenus), содержащихся в условиях аквакультуры. 40 рыб (большая выборка n > 30, согласно Г. Ф. Лакину [5]) средней массой 145 ± 15,7 г были индивидуально взвешены с точностью до 0,1 г и помещены на выращивание в стеклопластиковые бассейны размером 1,1 × 1,1 м в 2 группах (контроль и опыт). Контрольный и опытный рационы готовили методом влажного прессования [6]. Кормосмесь при производстве кормовых гранул перемешивали и добавляли в нее воду для получения крутого теста. Затем для формирования гранул (2 мм) кормосмесь пропускали через пресс-гранулятор. Полученные влажные гранулы собирали и обезвоживали в сушильном шкафу с горячим воздухом при температуре 50 °C до достижения трехпроцентного содержания влаги, затем помещали в пластиковые пакеты и хранили при температуре 4 °C.
Опытный корм готовили с добавкой сухой биомассы личинок мухи черной львинки. Для этого в корме произвели замену рыбной муки в количестве 30 % на биомассу из личинок мухи черной львинки. При выборе процентного соотношения замены рыбной муки полагались на ранее полученные данные об использовании личинок мухи черной львинки
в аквакормах для устойчивой аквакультуры [7].
В состав контрольного и опытного рационов входили следующие компоненты: рыбная мука, мясная и мясокостная мука, соевый шрот, пшеничная мука, витазар, килечный жир, кормовые аминокислоты, минерально-витаминный премикс, пробиотическая добавка. Соотношение протеин/жир в готовых кормах составляло 45 / 15. Корма были сбалансированы по аминокислотному и витаминно-минеральному составу. Кормление рыб осуществляли по поедаемости в дневное время с интервалом в 4 ч. Содержание основных питательных веществ контрольного и опытного рационов представлены
в табл. 1.
Таблица 1
Table 1
Химический состав контрольного и опытного рационов для годовиков стерляди
Chemical composition of control and experimental rations for sterlet yearlings
|
Корм |
Содержание, % |
Валовая энергия, МДж/кг |
||||
|
сырой протеин |
сырой жир |
клетчатка |
влага |
зола |
||
|
Контроль |
45 |
15 |
3,0 |
9 |
10,8 |
19 |
|
Опыт |
15,5 |
11 |
19,1 |
|||
В течение всего периода исследований (30 сут) проверялись параметры качества воды, включая дневные температурные показатели с минимумом 24 °C и максимумом 27 °C (средняя температура составила 26 ± 0,97 °C). Другие измерения варьировались следующим образом: концентрация кислорода 7,9–9,4 мг/л, насыщение 81–99 %.
В конце эксперимента, исходя из биометрических измерений, были определены основные показатели роста: абсолютный и среднесуточный прирост массы, коэффициент массонакопления, среднесуточная и удельная скорость роста. Рыбоводно-биологические показатели вычислялись в контрольной и опытной экспериментальных группах по следующим формулам [8–11]:
Абсолютный прирост массы = Wf – Ws;
Среднесуточный прирост массы = 
Среднесуточная скорость роста = 
Удельная скорость роста = 
Коэффициент массонакопления = 
где Ws и Wf – масса рыбы в начале и в конце эксперимента; t – продолжительность опыта, сут.
У выращенных особей стерляди прижизненным методом отбирались образцы крови. Далее кровь центрифугировали при 1 000 об/мин в течение 10 мин для получения сыворотки крови. В крови определяли количество общего сывороточного белка (ОСБ) биуретовым методом, процентное соотношение белковых фракций методом осаждения нейтральными солями и белковый коэффициент (соотношение количества альбуминов к количеству глобулинов) расчетным методом [12, 13].
Экспериментальную часть работ проводили в двойной повторности. Все числовые данные подвергались статистической обработке и представлены в виде среднего и стандартной ошибки среднего, достоверность различий рассчитывали с помощью t-критерия Стьюдента при нормальном распределении данных или с помощью критерия Манна – Уитни при ненормальном (Excel, Microsoft Office 2019, SigmaStat 3.5.).
Результаты и обсуждение
Рыбоводно-биологические и гематологические показатели являются адекватным показателем качества и сбалансированности потребляемого корма. Оценка эффективности частичной замены рыбной муки на муку из личинок мухи черной львинки показала, что лучшие показатели роста были отмечены в опытной группе рыб, где абсолютный прирост, среднесуточный прирост, среднесуточная скорость роста и коэффициент накопления массы были выше, чем в контроле (табл. 2, рис.).
Таблица 2
Table 2
Рыбоводно-биологические показатели годовиков стерляди, выращенной на контрольном и опытном
(частичная замена рыбной муки на муку из личинок мухи черной львинки) рационах
Fish-breeding and biological indicators of sterlet yearlings grown on the control and experimental
(partial replacement of fishmeal with flour from the larvae of black lion flies) rations
|
Показатель |
Вариант эксперимента |
|
|
Контроль |
Опыт |
|
|
Масса начальная, г |
145 ± 15,7 |
|
|
Масса конечная, г |
166,8 ± 24,1 |
169,3 ± 28,9 |
|
Длина абсолютная начальная, мм |
29,6 ± 1,8 |
|
|
Длина абсолютная конечная, мм |
34,6 ± 2,3 |
35,1 ± 3,4 |
|
Абсолютный прирост, г |
21,8 |
24,3 |
|
Среднесуточный прирост, г |
0,73 |
0,81 |
|
Среднесуточная скорость роста, % |
0,46 |
0,51 |
|
Удельная скорость роста, % |
0,20 |
0,23 |
|
Коэффициент массонакопления, ед. |
0,0072 |
0,008 |
|
Выживаемость, % |
100 |
|
|
Продолжительность опыта, сут |
30 |
|
Прирост массы годовиков стерляди на контрольном и опытном рационах
Weight gain of sterlet yearlings on control and experimental diets
Однако данные не являются достоверными, что говорит об эффективности и контрольного, и опытного вариантов корма. Выживаемость стерляди в обоих вариантах составила 100 %. Поскольку эффективность переработки корма прямо пропорциональна интенсивности кормления, можно сказать, что среднесуточная скорость роста в 0,51 % массы тела
в день в опытном варианте не является верхним пределом для удовлетворения потребностей годовиков стерляди, которые, скорее всего, способны эффективно использовать дополнительные объемы корма с проверенным уровнем белка.
Коэффициент достоверности аппроксимации, показывающий степень соответствия трендовой модели исходным данным в контрольном и опытном вариантах, приближался к значению 1 (см. рис.), это говорит о том, что модель точнее описывает имеющиеся данные.
Сведения, характеризующие белковый обмен в крови стерляди, полученные в процессе экспериментального кормления, представлены в табл. 3.
Таблица 3
Table 3
Соотношение белковых фракций сывороточного белка крови стерляди
The ratio of protein fractions of sterlet blood serum protein
|
Показатель |
Начало |
Конец эксперимента |
|
|
Опыт |
Контроль |
||
|
ОСБ, г/л |
20,70 ± 1,02А-Б* |
24,55 ± 2,57А-Б |
22,05 ± 1,31 |
|
Альбумины, % |
39,60 ± 7,32А-Б |
46,72 ± 7,79А-Б, Б-В |
42,43 ± 9,30Б-В |
|
α-глобулины, % |
34,98 ± 6,79 |
24,96 ± 5,66 |
20,47 ± 6,36 |
|
β-глобулины, % |
7,74 ± 2,05 |
17,17 ± 0,89 |
17,06 ± 5,11 |
|
γ-глобулины, % |
17,68 ± 4,73 |
11,16 ± 0,74Б-В |
20,04 ± 3,87Б-В |
|
Белковый коэффициент, усл. ед. |
0,90 ± 0,26 |
0,94 ± 0,19Б-В |
0,88 ± 0,31Б-В |
* Достоверно статистически значимые различия между: начало эксперимента – А; конец эксперимента, опыт – Б; конец эксперимента, контроль – В (р < 0,05).
Сывороточный белок в крови рыб представляет собой суммарную концентрацию альбуминов и глобулинов. Белки крови выполняют в организме множество важнейших функций: свертывание крови, поддержание постоянства рН крови, осуществление транспорта веществ (перенос жиров, билирубина, стероидных гормонов в ткани и органы), участвуют в иммунных реакциях и т. п. [14]. Уровень ОСБ в крови стерляди в процессе экспериментального кормления увеличился, особенно в опытной группе (достоверно) и соответствовал референсным значениям (см. табл. 3) [15]. Повышение концентрации белка в крови рыб свидетельствует о достаточной питательности корма и способствует увеличению прироста в результате наращивания мышечной массы, а следовательно, и более быстрому росту осетровых рыб [16]. Также высокая концентрация ОСБ является показателем оптимизации обменных процессов и высокой неспецифической резистентности организма осетровых рыб [17].
Фракционный состав белков сыворотки крови осетровых рыб высокогетерогенный и содержит от 15 до 21 компонента, которые представлены альбуминами (преальбуминами), α-, α2, β-, γ-глобулинами [18]. В норме, например, у русского осетра доля альбуминов составляет 32 %, α-глобулинов – 28 %, β-глобулинов – 25,5 %, γ-глобулинов – 14,5 % [19].
Как в начале, так и в конце эксперимента наибольшая доля в сывороточном белке стерляди приходилась именно на альбумины, причем достоверно эта доля увеличивалась в опытной группе и стала у них наибольшей в конце периода наблюдения (см. табл. 3). Альбумины отражают субстратную обеспеченность анаболических процессов организма рыбы и напряженность пластического обмена. Показатель доли альбуминов является одним из оценочных критериев адаптационных возможностей и жизнестойкости организма. Они осуществляют транспортную функцию, участвуют в поддержании коллоидно-осмотического давления плазменных белков, что играет ведущую роль в перераспределении воды и солей тканями, влияющими на вязкость крови [15]. Доля альбуминов у осетровых может составлять при средних 25 до 55 % и всегда наибольшая среди других фракций белков [14, 20].
На фоне увеличения доли альбуминов как в опытной, так и в контрольной группе снизилось количество α-глобулинов, в норме вторых по размеру доли сывороточных белков у русского осетра. Альфа-глобулины – это гликопротеиды, т. е. белки, связанные с углеводами. У животных опасным сигналом считается повышение их доли [21]. Уровень β-глобулинов в процессе экспериментального кормления с патологичного минимального увеличился и стал почти таковым как в норме, например у русского осетра, третьим по количеству в опытной группе, тогда как в контрольной он по-прежнему был минимальным (см. табл. 3). Бета-глобулины – это липопротеины. В их состав входят фосфолипиды и холестерин. К этой белковой фракции относится белок трансферрин, обеспечивающий транспорт железа [22]. Количество γ-глобулинов в опытной группе снизилось, а в контрольной увеличилось и стало достоверно выше в 2 раза, чем в крови рыб, получавших корм с добавкой биомассы черной львинки (см. табл. 3). Для γ-глобулиновой фракции характерна наименьшая концентрация, например
у русского осетра в норме, по литературным данным, 5,4–14,5 % [16, 19]. Эта фракция белков состоит из иммуноглобулинов, функционально представляющих собой антитела, которые обеспечивают иммунную защиту организма от инфекций и чужеродных веществ. Повышение уровня γ-глобулинов свидетельствует о напряжении защитно-приспособи-
тельных сил организма [22]. Белковый коэффициент на протяжении всего эксперимента у особей стерляди был в норме, но минимальный уровень был отмечен для контрольной группы. Снижение этого коэффициента может быть связано с ухудшением питания, патологиями работы печени, снижением иммунитета и пр.
Таким образом, эксперимент по использованию добавки в корм для осетровых рыб биомассы личинок мухи черная львинка показал ее положительное влияние на белковый обмен их организма. Количество сывороточного белка, как и доля фракции альбумина в крови у рыб из опытной группы, выросли и были выше, чем у рыб из контрольной, что свидетельствует о полноценном использовании белковой составляющей испытуемого корма. Фракционный состав сывороточного белка у стерляди из опытной группы был близок к норме, характерной для осетровых, тогда как у рыб из контрольной группы наблюдали повышенный уровень γ-глобулинов и снижение белкового коэффициента, что может свидетельствовать о напряжении иммунитета организма, в отличие от рыб из опытной группы, где доля этой фракции была в пределах нормы.
Заключение
Основная цель текущего эксперимента заключалась в установлении эффективности использования в кормах для годовиков стерляди сухой биомассы из личинок мухи черной львинки в качестве альтернативного источника белка. Полученные экспериментальные данные имеют особую практическую ценность, поскольку позволяют рекомендовать частичную замену рыбной муки (30 %)
в кормах для стерляди с целью повышения иммунного статуса выращиваемых рыб. В результате проведенных исследований был получен положительный опыт. Уровень общего сывороточного белка, его фракционный состав у стерляди из опытной группы был близок к норме, характерной для осетровых, тогда как у рыб из контрольной группы наблюдали повышенный уровень γ-гло-
булинов и снижение белкового коэффициента, что может свидетельствовать о напряжении защитно-приспособительных сил организма, в отличие от рыб из опытной группы, где доля этой фракции была в пределах нормы.
1. Boscari E., Vitulo N., Ludwig A., Caruso C., Mugue N. S., Suciu R., Onara D. F., Papetti C., Marino I. A. M., Zane L. Fast genetic identification of the Beluga sturgeon and its sought-after caviar to stem illegal trade. Food Control, 2017, vol. 75, pp. 145-152.
2. Kolman R. Sturgeon. Rearing and cultivation. A guidebook for fish farmers, 2nd edn. Wyd. IRS, 2010. 134 p.
3. Basto A., Matos E., Valente L. M. Nutritional value of different insect larvae meals as protein sources for European sea bass (Dicentrarchus labrax) juveniles. Aquaculture, 2020, vol. 521 (1–2), p. 735085. DOI:https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.2020.735085.
4. Koroleva A. V., Zalevskaya I. N. Sravnitel'nyj analiz elektroforeticheskogo sostava belkov pecheni i myshechnoj tkani morskogo ersha, obitayushchego v buhtah s razlichnym antropogennym vozdejstviem [Comparative analysis of the electrophoretic composition of liver proteins and muscle tissue of a sea ruff in-habiting bays with various anthropogenic influences]. Ekosistemy, ih optimizaciya i ohrana, 2010, vol. 3, pp. 110-118.
5. Lakin G. F. Biometriya [Biometrics]. Moscow, Vysshaya shkola Publ., 1990. 293 p.
6. Ponomarev S. V., Gamygin E. A., Nikonorov S. I., Ponomareva E. N., Grozesku Yu. N., Bahareva A. A. Tekhnologii vyrashchivaniya i kormleniya ob"ektov ak-vakul'tury yuga Rossii (spravochnoe, uchebnoe posobie) [Technologies of cultivation and feeding of aquaculture facilities in the South of Russia (reference, training manual)]. Astrahan', Nova plyus Publ., 2002. 264 p.
7. Mohan K., Karthick R. D., Muralisankar T., Ganesan A., Sathishkumar P., Revathi N. Use of black soldier fly (Hermetia illucens L.) larvae meal in aquafeeds for a sustainable aquaculture industry: A review of past and future needs. Aquaculture, 2022, vol. 553, p. 738095. https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.2022.738095.
8. Castell J. D., Tiews K. Report of the EIFAC, IUNS and ICES Working Group on the standardization of the methodology in fish nutrition research (Hamburg, Federal Republic of Germany, March 21-23, 1979). EIFAC Tech. pap. 36, 1979, pp. 1-24.
9. Reznikov V. F., Baranov S. A., Starikov E. A., Tolchinskij G. I. Standartnaya model' massonakopleniya ryby [The standard model of fish mass accumulation]. Mekhanizaciya i avtomatizaciya rybovodstva i rybolovstva vo vnutrennih vodoemah: sbornik nauchnyh trudov VNIIPRH, 1978, iss. 77, pp. 12-14.
10. Kupinskij S. V. Produkcionnye vozmozhnosti ob"ektov akvakul'tury [Productive capabilities of aquaculture facilities]. Moscow, ZAO «Ekon-Inform», 2010. 140 p.
11. Lugert V. A review on fish growth calculation: multiple functions in fish production and their specific application. Reviews in aquaculture, 2016, vol. 8, no. 1, pp. 30-42.
12. Alejnikova T. L., Rubcova G. V. Biohimiya. Rukovodstvo k prakticheskim zanyatiyam po biologicheskoj himii [A guide to practical classes in biological chemistry]. Moscow, Vysshaya shkola Publ., 1988. 240 p.
13. Metodicheskie ukazaniya po opredeleniyu urovnya estestvennoj rezistentnosti i ocenke immunnogo statusa ryb (utv. Departamentom veterinarii Minsel'hozproda RF ot 25 noyabrya 1999 g. № 13-4-2/1795) [Guidelines for deter-mining the level of natural resistance and assessing the immune status of fish (approved by the Department of Veterinary Medicine of the Ministry of Agriculture and Food of the Russian Federation dated November 25, 1999 No. 13-4-2/1795)]. Available at: https://base.garant.ru/2158921/#friends (accessed: 18.08.2024).
14. Simon M. Yu. Osnovnі gematologіchnі pokazniki osetrovih vidіv rib (Acipenseridae) [The main hematological leprosy of sturgeon species fish (Acipenseridae)]. Ribogospodars'ka nauka Ukraїni, 2017, no. 1 (39), pp. 92-117.
15. Pronina G. I., Koryagina N. Yu. Referensnye znacheniya fiziologo-immunologicheskih pokazatelej gidrobiontov raznyh vidov [Reference values of physiological and immunological parameters of hydrobionts of different species]. Vestnik Astrahanskogo gosudarstvennogo tekhnicheskogo universiteta. Seriya Rybnoe hozyajstvo, 2015, no. 4, pp. 103-108.
16. Muhramova A. A. Ocenka sostoyaniya molodi russkogo osetra po rybovodno-biologicheskim parametram i biohimicheskim pokazatelyam krovi posla kormleniya eksperimental'nymi kormami [Assessment of the condition of juvenile Russian sturgeon by fish-breeding and biological parameters and biochemical blood parameters after feeding with experimental feeds]. Vestnik KazNU. Seriya ekologicheskaya, 2012, no. 1 (33), pp. 103-106.
17. Bahareva A. A. Nauchno-obosnovannye metody povysheniya produktivnosti remontno-matochnyh stad osetrovyh ryb za schet optimizacii tekhnologii kormleniya i soderzhaniya v usloviyah rybovodnyh hozyajstv Volgo-Kaspijskogo bassejna. Avtoreferat dissertacii … d-ra s.-h. nauk [Scientifically based methods of increasing the productivity of repair and brood stocks of sturgeon fish by optimizing the technology of feeding and maintenance in fish farms of the Volga-Caspian basin. Abstract of the dissertation of ... Doctor of Agricultural Sciences]. Ust'-Kinel'skij, 2016. 32 p.
18. Bal' N. V., Geraskin P. P., Mishin E. A. Frakcionnyj sostav syvorotochnyh belkov russkogo osetra s priznakami miopatii [Fractional composition of Russian sturgeon whey proteins with signs of myopathy]. Osetrovoe hozyajstvo vodoemov SSSR: materialy Vsesoyuznogo soveshchaniya (Astrahan', noyabr' 1989 g.). Volgograd, Volgogradskaya Pravda Publ., 1989. Pp. 16-20.
19. Bazelyuk N. N., Kozlova N. V., Makarova E. G., Fajzulina D. R., Baregamyan M. A. Proteinogrammy syvorotki krovi russkogo osetra (lat. Acipenser gueldenstaedtii) [Proteinograms of the blood serum of the Russian sturgeon (lat. Acipenser gueldenstaedtii)]. Aktual'nye problemy bioraznoobraziya i prirodopol'zovaniya: materialy Vserossijskoj nauchno-prakticheskoj konferencii (Kerch', 26 sentyabrya – 01 oktyabrya 2017 g.). Kerch', Arial Publ., 2017. Pp. 20-25.
20. Luk'yanenko V. I. Toksikologiya ryb [Fish toxicology]. Moscow, Pishchevaya promyshlennost' Publ., 1967. 216 p.
21. Erohina I. A. Proteinogrammy plazmy krovi tyulenej v svyazi s ocenkoj fiziologicheskogo sostoyaniya zhivotnyh [Proteinograms of blood plasma of seals in connection with the assessment of the physiological state of animals]. Aktual'nye voprosy veterinarnoj biologii, 2009, no. 1 (1), pp. 7-13.
22. Kcoeva I. I., Gabolaeva A. R., Caliev B. Z. Sravnitel'naya harakteristika belkov krovi ryb i ih frakcij [Comparative characteristics of fish blood proteins and their fractions]. Izvestiya Gorskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta, 2010, vol. 47, no. 1, pp. 110-113.
